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Konstruktion temperatur-regulierbarer Expressions-Vektoren fuer Bacillus subtilis

1) Isolierung von Hitzeschock-Promotoren aus chromosomaler DNA von Bacillus licheniformis. 2) Charakterisierung der Promotoren bezueglich Staerke und Induzierbarkeit. 3) Sequenzierung der Restriktionsfragmente mit Promotor-Aktivitaet. 4) Kartierung der Promotoren mittels S1-nuclease. 5) Einbau geeigneter Promotoren in Plasmid-Vektoren. 6) Test der Expressionsvektoren durch den Einbau geeigneter Bacillus-Gene. 7) Isolierung von Promotor-up Mutationen

Konstruktion von Sicherheitsexpressionsvektoren mit konstitutiven und temperaturregulierbaren Promotoren fuer Bacillus subtilis

1) Fortfuehrung der waehrend der ersten Antragsperiode begonnenen Arbeiten zur Isolierung und Sequenzierung von Hitzeschock (HS)-Genen aus B subtilis mit ihren HS-Promotoren. 2) Lokalisierung starker konstitutiver Promotoren auf bereits isolierten Restriktionsfragmenten durch Sequenzierung und S1-Kartierung. 3) Konstruktion und Umwandlung eines Sicherheitsvektors in einen Expressionsvektor durch Einbau konstitutiver und regulierbarer Promotoren. Optimierung des temperatur-induzierbaren Systems durch Inaktivierung des chromosomalen DNAK-Gens.

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